實驗干貨 | 常用分子生物學技術原理

1. 分子雜交與印跡技術

（1）探針是經(jīng)過特殊標記，能與待測單鏈核酸分子互補結合的已知核酸片段

（2）印跡是將電泳分離后的大分子轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，以便雜交的技術

（3）DNA印跡：Southern blotting，用于檢測基因組DNA

（4）RNA印跡：Northern blotting，主要用來檢測mRNA的表達水平

（5）蛋白質(zhì)印跡：Western blotting，用于檢測蛋白質(zhì)的水平

2. PCR技術

（1）反應體系：單鏈DNA模板、特異性DNA引物、耐熱DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶）、dNTPs底物、含Mg2+的緩沖液。

（2）反應步驟：變性、復性、延伸

（3）逆轉(zhuǎn)錄PCR：即RT-PCR，在PCR之前先將單鏈mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。這是目前從RNA水平出發(fā)研究基因表達或獲得目的基因最有效的方法。

（4）應用：目的基因的克隆、基因的體外突變、微量DNA或RNA擴增、DNA序列測定、基因突變分析

3. 蛋白質(zhì)相互作用研究

酵母雙雜交技術、CoIP

4. DNA-蛋白質(zhì)相互作用

電泳遷移率變動分析（EMSA）、染色質(zhì)免疫沉淀技術（ChIP）

5. 基因敲除

即gene knock-out，通過同源基因重組原理使得某個基因活性喪失，從而研究該基因功能的方法